¿Por qué nuevas técnicas?

Hasta ahora, el diagnóstico prenatal preciso y exacto de las importantes anomalías cromosómicas (por ejemplo, cambio en el número o aneuploidía) se suele realizar mediante el estudio citogenético de los cromosomas, lo que denominamos el cariotipo. Esto requiere que las células fetales obtenidas mediante amniocentesis, o mediante biopsia de las vellosidades coriónicas, o alguna vez a partir de la sangre fetal, sean mantenidas en cultivo una serie de días para que se puedan reproducir y, de ese modo, visualizar los cromosomas al microscopio. Aunque los métodos de cultivo han mejorado, todavía se requieren 2 o 3 semanas desde la extracción de la muestra hasta que se obtiene el resultado.

Este tiempo se hace muy largo cuando existen temores de que el feto pueda tener una anomalía cromosómica, y aún más si las pruebas previas de diagnóstico prenatal no invasivas (bioquímica de la sangre, signos ecográficos) sugieren la presencia de tales anomalías. La preocupación y ansiedad de los padres puede ser grande, y ello aconseja conseguir métodos que acorten el tiempo de diagnóstico.
La técnica FISH (hibridación in situ con fluorescencia) se aplica en las células obtenidas por los mismos medios de extracción pero puede hacerse sin necesidad de cultivo celular previo; es, sin embargo, muy laboriosa.

La técnica QF-PCR

En los últimos 10 años se ha ido desarrollando una nueva técnica. Se llama QF-PCR, un acrónimo de Quantitative Fluorescence Polymerase Chain Reaction. Es decir, una técnica que combina la PCR (técnica de la que después explicaremos su valor esencial) con la técnica de fluorescencia cuantificable. Las muestras de células se obtienen de modo similar a las descritas (amniocentesis, vellosidades coriónicas), pero la QF-PCR muestra las siguientes ventajas:

- no requiere cultivo de células
- realiza el diagnóstico de las aneuploidías y otras importantes anomalías cromosómicas en 24-48 horas
- tiene alta sensibilidad
- muestra alta especificidad
- al haberse automatizado, permite analizar gran número de muestras de forma simultánea, reduciendo el costo.

La técnica PCR consigue multiplicar con rapidez porciones del ADN de los cromosomas (por ejemplo, el 21), cuando estas porciones han sido previamente elegidas y, por así decir, fijadas o sujetadas por unos elementos que se llaman prímeros. Esta multiplicación en cadena se consigue mediante la acción de una enzima que se llama polimerasa cuya función es la de promover la proliferación del ADN (de ahí el nombre: reacción de polimerasa en cadena). La cantidad final de esa porción de ADN previamente elegida, merced al proceso de multiplicación, será proporcional a la cantidad inicial de ADN que exista. Es decir, si las células fetales tienen 3 cromosomas 21 en lugar de 2 (trisomía 21), la cantidad final de ADN propio del cromosoma 21 será mayor que si sólo hubiese habido 2 cromosomas 21. La cuantificación del ADN se consigue mediante la técnica de la fluorescencia (quantitative fluorescence). De ahí que en conjunto la técnica se llame QF-PCR.

Referencias

1. Mann K, Donaghue C, Fox SP, Docherty Z, Ogilvie CM. Strategies for the rapid prenatal diagnosis of chromosome aneuploidy. Eur J Human Genet 2004 (Nov); 12(11): 907-915.

2. Cirigliano V, Voglino G, Canadas MP, Marongiu A, Ejarque M, Ordonez E, Plaja A, Massobrio M, Todros T, Fuster C, Campogrande M, Egozcue J, Adinolfi M. Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies by QF-PCR. Assessment on 18,000 consecutive clinical samples. Molec Human Reproduct 2004 (Nov); 10(11): 839-846.

Estos dos estudios confirman el valor de la técnica mediante análisis comparado con los cariotipos por citodiagnóstico. El primero se ha realizado en 7.720 muestras prenatales, y el segundo en 17.129 muestras, la mayoría de ellas obtenidas por amniocentesis.


Secuenciación de ADN fetal en sangre materna

Esta técnica se basa en un primer descubrimiento de que en sangre materna existen células fetales que han atravesado la placenta y circulan en la sangre materna, y en un segundo descubrimiento de que existen también ácidos nucleicos fetales libres, desligados de sus células de origen. Estos hechos han promovido el desarrollo de técnicas bioquímicas dirigidas a cuantificar el ADN fetal que circula en sangre materna.

Para ello se realiza la secuenciación del ADN fetal, libre de contaminación celular, mediante tecnología de alto rendimiento en el plasma de la mujer embarazada. La técnica permite obtener como media 5 millones de secuencias de ADN localizadas en cada muestra, que después se relacionan con el correspondiente cromosoma y, lo que es más útil, se cuantifica. De este modo, si existe una trisomía de un determinado cromosoma, se detectan las secuencias de ADN que están en exceso y corresponden a ese cromosoma, diagnosticándose la trisomía.

La ventaja del método estriba en que es un método definitivamente diagnóstico (no presuntivo), en el que basta extraer un poco de sangre de la madre. La prueba se realiza ya en la 14 semana de embarazo.

Referencia

Fan HC, Blumenfeld YJ, Chitkara U, Hudgins L, Quake SR. Nonivasive diagnosis of fetal aneuploidy by shotgun sequencing DNA from maternal blood. Proc Natl Acad Sci USA.
www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.0808319105.


Canal Down21
Actualizado diciembre 2008

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