¿Por qué una nueva técnica?

Hasta ahora, el diagnóstico prenatal preciso y exacto de las importantes anomalías cromosómicas (por ejemplo, cambio en el número o aneuploidía) se suele realizar mediante el estudio citogenético de los cromosomas, lo que denominaos el cariotipo. Esto requiere que las células fetales obtenidas mediante amniocentesis, o mediante biopsia de las vellosidades coroideas, o alguna vez a partir de la sangre fetal, sean mantenidas en cultivo una serie de días para que se puedan reproducir y, de ese modo, visualizar los cromosomas al microscopio. Aunque los métodos de cultivo han mejorado, todavía se requieren 2 o 3 semanas desde la extracción de la muestra hasta que se obtiene el resultado.

Este tiempo se hace muy largo cuando existen temores de que el feto pueda tener una anomalía cromosómica, y aún más si las pruebas previas de diagnóstico prenatal no invasivas (bioquímica de la sangre, signos ecográficos) sugieren la presencia de tales anomalías. La preocupación y ansiedad de los padres puede ser grande, y ello aconseja conseguir métodos que acorten el tiempo de diagnóstico.

La técnica FISH (hibridación in situ con fluorescencia) se aplica en las células obtenidas por los mismos medios de extracción pero puede hacerse sin necesidad de cultivo celular previo; es, sin embargo, muy laboriosa.

Qué es la técnica QF-PCR

En los últimos 10 años se ha ido desarrollando una nueva técnica. Se llama QF-PCR, un acrónimo de Quantitative Fluorescence Polymerase Chain Reaction. Es decir, una técnica que combina la PCR (técnica de la que después explicaremos su valor esencial) con la técnica de fluorescencia cuantificable. Las muestras de células se obtienen de modo similar a las descritas (amniocentesis, vellosidades coroideas), pero la QF-PCR muestra las siguientes ventajas:
- no requiere cultivo de células
- realiza el diagnóstico de las aneuploidías y otras importantes anomalías cromosómicas en 24-48 horas
- tiene alta sensibilidad
- muestra alta especificidad
- al haberse automatizado, permite analizar gran número de muestras de forma simultánea, reduciendo el costo.

La técnica PCR consigue multiplicar con rapidez porciones del ADN de los cromosomas (por ejemplo, el 21), cuando estas porciones han sido previamente elegidas y, por así decir, fijadas o sujetadas por unos elementos que se llaman prímeros. Esta multiplicación en cadena se consigue mediante la acción de una enzima que se llama polimerasa cuya función es la de promover la proliferación del ADN (de ahí el nombre: reacción de polimerasa en cadena). La cantidad final de esa porción de ADN previamente elegida, merced al proceso de multiplicación, será proporcional a la cantidad inicial de ADN que exista. Es decir, si las células fetales tienen 3 cromosomas 21 en lugar de 2 (trisomía 21), la cantidad final de ADN propio del cromosoma 21 será mayor que si sólo hubiese habido 2 cromosomas 21. La cuantificación del ADN se consigue mediante la técnica de la fluorescencia (quantitative fluorescence). De ahí que en conjunto la técnica se llame QF-PCR.

Resultados conseguidos

Recientemente se han publicado dos importantes trabajos en los que se demuestra la sensibilidad y especificidad de esta técnica para detectar las modificaciones en el número de cromosomas o aneuploidías, y entre ellas la trisomía 21. Los resultados se obtienen en 24 horas. A pesar de lo expuesto, los autores de ambos trabajos consideran e insisten en que es un método válido para diagnósticos rápidos, pero que conviene que sean confirmados por los métodos citogenéticos habituales. Los trabajos son los siguientes:

1. Mann K, Donaghue C, Fox SP, Docherty Z, Ogilvie CM. Strategies for the rapid prenatal diagnosis of chromosome aneuploidy. Eur J Human Genet 2004 (Nov); 12(11): 907-915.

2. Cirigliano V, Voglino G, Canadas MP, Marongiu A, Ejarque M, Ordonez E, Plaja A, Massobrio M, Todros T, Fuster C, Campogrande M, Egozcue J, Adinolfi M. Rapid prenatal diagnosis of common chromosome aneuploidies by QF-PCR. Assessment on 18,000 consecutive clinical samples. Molec Human Reproduct 2004 (Nov); 10(11): 839-846.

En ambos estudios se ha confirmado el valor de la técnica mediante análisis comparado con los cariotipos por citodiagnóstico. El primero se ha realizado en 7.720 muestras prenatales, y el segundo en 17.129 muestras, la mayoría de ellas obtenidas por amniocentesis.

El segundo de los estudios ha sido realizado parcialmente en España: Departamento de Genética Molecular, General Lab, Calle Amigó 12. 08021 Barcelona (España).

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